液相色谱HPLC中的柱前衍生和柱后衍生

1、为什么要用衍生?

衍生化学反应就是加入衍生试剂,然后让样品和衍生试剂反应,生成液相可以检测出来的物质。然后在进行分析。当然,如果能直接进样测定出来的样品就不需要衍生了。

比如说,柱前衍生测定氨基酸。因为氨基酸既没有紫外吸收,也没有荧光发射。所以液相是测不出来的。

衍生化 为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲,多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性;对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的响应。

2、衍生化分类:柱前衍生和柱后衍生。

柱前衍生:在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应,反应产物在分析柱上实现分离,实际分离的是衍生产物,检测的也是衍生产物;

柱后衍生:分离物在分析柱中实现分离后,在衍生池内与衍生剂反应,在柱子中分离的是目的物,在检测器处检测的是衍生产物。

3、适用的化合物:生物酸/碱、胺类、抗生素(聚醚类抗生素多见)和氨基酸类。

4、衍生化要求?

1)衍生剂必须过量且稳定;不过量,反应不完全,检测不充分;不稳定,重现性差。

2)衍生物、衍生产物和衍生副产物容易分离。如果只能检测到衍生产物 好。

3)衍生反应快速完全。反应慢,柱前衍生还可以,但柱后不行。因为流速固定,衍生池管路长度一定,留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样,但也是影响效率的。

两种衍生比较

柱前衍生:

优点:对设备要求不高,可以手工衍生,而且对衍生时间要求相对宽泛。

缺点:引入了过多的物质,如:衍生剂、衍生产物(当然这个是检测需要的)和衍生副产物,对柱子有潜在的负面影响,另外采用手工衍生也会引入过多的影响因素。

柱后衍生:

优点:重现性好,影响因素少,引入物质比较少。

缺点:可能有扩散问题,在柱子中分离结束后,就存在扩散,如果衍生慢(必然流速低)、管路长扩散问题就会比较严重,再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池,对于设备要求较高。

泰特仪器柱后衍生系统(光化学衍生,一级柱后衍生,二级柱后衍生)可以改善扩散问题,满足各种设备要求。 

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