草甘膦TW-PCD2000柱后衍生设备检测方案书

草苷膦和其代谢物AMPA 的测定,达到并超过环境保护署(EPA)547 方法要求的准确度与灵敏度。

草苷膦是一种广谱除草剂。它广泛用于农业,所以存在于饮用水中。一种灵敏的分析方法被开发用来分析草苷膦和其基本代谢物甲氨磷酸的水平。

泰特的柱后衍生方法也可以对植物和土壤中的草苷膦和甲氨磷酸进行测定。利用简单的提取过程,然后利用阳离子交换柱芯进行清除,改进了蔬菜样品的制备过程。

背景

草苷膦和甲氨磷酸被强离子交换柱分离。(完全磺酸化,交联的聚苯乙烯,K+/H+混合模式)。等度分离之后,分析柱被KOH 溶液再生,然后用洗脱液进行再平衡。

通过两步柱后衍生反应实现荧光检测。 步,将草苷膦被次氯酸盐氧化为氨基乙酸。第二步,氨基乙酸与邻苯二醛和ThiofluorTM(一种pH9-10 的硫醇)产生高荧光的异吲哚。AMPA 不需要 步的氧化过程便可与OPA 试剂反应(如图); 过氧化会使它产生的荧光减弱。

基本的样品配制

下面是蔬菜和水样品中含有的草苷膦的基本样品制备过程。蔬菜的测定方法与AOAC 的测定过程不同。我们开发了离子交换柱芯,省略了许多繁琐的提取过程,提高了提取的重复性。该柱芯经过本实验室可靠的认证。

蔬菜样品分析

提取:

取去除水分的25g 匀质样品,加水至125ml。高速搅拌3-5 分钟,然后离心10 分钟。将20ml 水性提取液转移至离心管中,加15ml 亚甲基氯以形成非极性共聚物,振摇2-3 分钟,离心10 分钟。转移4.5mL 上清液至离心管中,加入0.50mL 酸性改性剂(16g KH2PO4,160mL H2O,40mL 甲醇,13.4mLHCl),振摇后离心10 分钟。

根据基质调整方法:蔬菜含大量1)水2)蛋白质3)脂肪

1) 因为玉米中含有大量的水,将检测样品量降至12.5g

2) 含有大量蛋白质时加入100μL HCl 至20mL 的粗提物中,振摇离心10min。

3) 脂肪含量高的玉米,进行两次二甲基氯提取。

阳离子交换提取:转移1mL 前提取物(含0.18g 玉米或0.09 干燥过的玉米)至交换柱中。用0.7mL 洗提液(160mL H2O,2.7mL HCl,40mL 甲醇)洗脱,弃去洗脱液,重复两次。然后用12mL 洗提液用圆底烧瓶收集。使用旋转蒸发仪至水浴中恒温40℃蒸发至干燥,或收集于离心管中使用真空旋转蒸发仪。用2.0mL洗提液溶解滤渣(1.5mL 对干躁的玉米)。提取物在蒸发前可在冰箱中保存7 天。

水样分析

用0.45μm 的滤膜过滤,进样200-400μL

如果草苷膦出现分叉峰,在样品瓶中直接滴2 滴Restore 溶液。

试剂制备

注意:5%次氯酸钠用来制备氧化试剂

将945mL 次氯酸稀释液直接倒入试剂瓶中,贴上氧化试剂标签。加100μL 5%次氯酸钠于稀释液中。根据调整加入的氧化试NaOCl 的体积,得到首张色谱图后,调整草苷膦和甲氨磷AMPA 的相对峰面积大小。右图显示了两者之间的关系。

盖上试剂瓶盖,关闭通风阀,完全的振摇混合完全。

注意:不是使用次氯酸钙作为氧化试剂。它会造成柱后反应器的堵塞。一年的质保不包括由次氯酸钙造成的损坏。EPA 草案547 的方法关于这一点是错误的。Ca3PO4 不溶于水。

OPA 试剂

1 将945mL OPA 稀释液(104)倒入试剂瓶,留下大概5mL 进行第五步。

2 盖上瓶盖,打开通风阀,打开气源。使惰性气体喷射满全瓶。持续冒泡10 分钟

3 将100mgOPA(Cat No O120)溶解于10mL 色谱纯甲醇中。

4 关闭气源,打开瓶盖。将OPA 溶液倒入已经去氧的稀释液中。

5 溶解2g ThiofluorTM(Cat No 3700-2000)与 步留下的5mLOPA 稀释液中并倒入试剂瓶。

6 盖上瓶盖,打开气源,使其喷射几分钟后关闭进气阀。轻轻摇动试剂瓶使其完全混匀。

注意:不推荐自行配制OPA 稀释液,因为硅酸钠包含许多重金属离子和不溶物质。它们将会沉淀在反应器和流通池中。一年的质保不包括此种污染带来的损坏。

OPA 试剂对氧敏感并会降解。当OPA 试剂瓶中充满惰性气体时,OPA 试剂的活性和保持2 周。

柱后衍生条件

草苷膦分析使用1954150 分析柱和1953020 保护柱

柱温:55℃ HPLC 流速:0.4mL/min

HPLC 程序

准确的再平衡时间取决于HPLC 的内体积。当基线和柱压平稳2 分钟,则色谱柱已充分平衡。

柱后条件:

试剂1:100μL 5%NaOCl 于GA116 稀释液中

试剂2:邻苯二醛和ThiofluorTM 于GA104 稀释液中

泵1:流速0.30mL/min

泵2:流速0.30mL/min

反应器1 体积:500μL

反应器2 体积:100μL

反应器1 温度:36℃

反应器2 温度:室温

分析过程

在设定后使色谱柱平衡20 分钟

注射10μL 草苷膦测试混合液(或者一定体积的自制标准品),收集 张谱图。下图是一张标准的草苷膦和AMPA 色谱图,其中草苷膦和AMPA 浓度相同,峰高应该相同。但峰高受次氯酸盐试剂1 的影响。

样品色谱图

草苷膦测试混合物,10μL 进样

草苷膦和AMP, 13Pppb 于K200, 100μL 进样

椰菜样品中含有的草苷膦和AMPA,50ppb,100μL 进样。

完成分析之后,执行关闭程序,将分析柱保存于RG019 中。

注意:保存OPA 试剂是应保留惰性气体,关闭试剂瓶上蓝色的试剂阀防止不使用时试剂虹吸。

注意事项

1.配制试剂过程中要始终配带手套,OPA 与ThiofluorTM 试剂会引起皮肤刺激。OPA 试剂为对氧敏感,不断降解。得到 佳的灵敏度需新制溶液。在惰性气体的保护下,OPA 试剂可以保存两周。ThiofluorTM 具有强烈的吸湿性,一定要在密封性好的容器中保存。

2.不推荐用户自制OPA 稀释剂,因为硼酸钠(任何等级)包含着大量的重金属离子污染物和不溶物质。这些不纯物会沉淀在反应器和流通池中。由此造成的损坏不在保修范围之中。

3.通常只会污染保护柱,只更换保护柱,将省去去清洗与再平衡。

4.需要特别注意的污染物:铁离子、多价的阳离子、有机染料、表面活性剂、清洁剂和油脂。它们会引起不可逆的损坏。

5.有机溶剂会引起色谱柱中的树脂膨胀,产生高背压和峰展宽。色谱柱有时可被再生。

将洗脱液与色谱柱一起使用。

6.测试混合物只能作为草苷膦的定性测定,不推荐将其作为校正使用。

7.所有样品必须通过0.45μm 薄膜过滤。如果存在胶体,则需进一步过滤。

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